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血清使用中的常見問題
瀏覽次數(shù):5257發(fā)布日期:2014-09-18

? 如何解凍血清才不會使產(chǎn)品質量受損?
將血清從冷凍箱取出后,推薦將其置于室溫下使之*融解。必須注意的是,融解過程中必須不時地搖晃均勻,血清融解后不可在室溫下放置過長時間。
? 血清中包含絮狀沉淀,它們是什么,怎么處理? 沉淀包含纖維蛋白和脂蛋白。這是正常特性,不會影響產(chǎn)品性質。要除去沉淀,離心血清(400g,1-2分鐘)或者簡單的讓其沉淀在瓶子底部,將血清小心的轉移到另一個無菌瓶里(一般不建議采用過濾的方法除去沉淀,因為沉淀會堵塞濾膜而無法過濾)。大多情況輕輕搖動沉淀并加熱至37℃就會再溶解。所以,使用產(chǎn)品時要搖動并加熱血清至37℃,沉淀會自然消失。
? 如何避免血清中產(chǎn)生沉淀?
按如下操作可避免沉淀的產(chǎn)生:
1. 解凍血清時,請隨時將之搖晃均勻,使溫度及成分均一,減少沉淀的發(fā)生。
2. 血清分裝凍存時,須規(guī)則搖晃均勻(小心勿造成氣泡),使溫度與成分均一。
3. 勿直接由-20℃直接至37℃解凍,因溫度改變太大,容易造成蛋白質凝結而發(fā)生沉淀。
4. 勿將血清置于37℃太久,否則血清會變得渾濁,同時血清中許多較不穩(wěn)定的成份也會因此受到破壞,從而影響血清的品質。
5. 血清的熱滅活非常容易造成沉淀物的增多,若非必要,可以無須做此步驟。
6. 若必須做血清的熱滅活,請遵守56℃,30分鐘的原則,并且隨時搖晃均勻。溫度過高,時間過久或搖晃不均勻,都會造成沉淀物的增多。
? 培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素后,可長期保存嗎?
一旦您在新鮮培養(yǎng)基中添加了血清和抗生素時,您應該在兩到三周內使用它。因為一些抗生素和血清中的基本成分在解凍后就開始降解。
? 保存血清的方法?
我們建議血清應保存在-2O℃。若存放于4℃時,請勿超過一個月。若一次無法用完一瓶,建議無菌分裝血清至恰當?shù)臏缇萜鲀龋俜呕乩鋬觥?br />? 為什么要熱滅活血清?
加熱可以滅活補體系統(tǒng)。激活的補體參與溶解細胞事件,刺激平滑肌收縮,細胞和血小板釋放組
胺,激活淋巴細胞和巨噬細胞。在免疫學研究,培養(yǎng)ES 細胞、平滑肌細胞時,推薦使用熱滅活血清。
? 有必要做熱滅活嗎?
實驗顯示,經(jīng)過正確處理的熱滅活血清,對大多數(shù)的細胞而言是不需要的。經(jīng)此處理過的血清對
細胞的生長只有微小的促進,或*沒有任何作用,甚至通常因為高溫處理影響了血清的質量,而造
成細胞生長速率的降低。而經(jīng)過熱處理的血清,沉淀物的形成會顯著的增多,這些沉淀物在倒置顯微
鏡下觀察,像是“小黑點”,常常會讓研究者誤以為是血清遭受污染,而把血清放在37℃環(huán)境中,又
會使此沉淀物更增多,使研究者誤認為是微生物的分裂擴增。
若非必須,可以不需要做熱處理這一步。不但節(jié)省時間,更確保血清的質量!
? 細胞培養(yǎng)中出現(xiàn)黑點是污染嗎?如何處理?
一旦您在細胞培養(yǎng)的過程中發(fā)現(xiàn)有黑點生成,首先,要肉眼觀察培養(yǎng)基是否混濁,然后,在鏡下
觀察培養(yǎng)細胞生長的狀態(tài),黑點是否游動。如果細胞被污染,微生物則會大量繁殖,培養(yǎng)基就會迅速
變黃、變混濁。污染包括細菌污染、支原體污染等。
如果在鏡下觀察細胞,生長狀態(tài)良好,與黑點出現(xiàn)前相比,沒有任何變化,那么,黑點的出現(xiàn)可
能與以下幾種情況有關:
(1)細胞生長過老,破碎的細胞殘骸;
(2)血清質量不好,反復凍融的結果;
(3)配制培養(yǎng)基的pH 值偏高,不宜細胞生長;
(4)配制培養(yǎng)基的水質、容器不合格。可應用離心、過濾的方法去除這些黑點;
(5)培養(yǎng)原代細胞中出現(xiàn)小黑點,可能是原代組織中的雜質,多次傳代可以消除。
? 細胞培養(yǎng)中如何防止黑點生成?
(1) 盡可能地減少血清凍融次數(shù)。
(2) 培養(yǎng)基無需37℃水浴。
(3) 培養(yǎng)基保持*PH 值7.0- 7.2。
(4) 嚴格控制配制培養(yǎng)基的水質,容器定期刷洗。

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